PeproTech公司的重組細(xì)胞因子產(chǎn)品經(jīng)過了十分嚴(yán)格的生產(chǎn)、純化及質(zhì)檢過程,保證其在投放市場(chǎng)之前,達(dá)到如下要求:
1. 真實(shí)性:重組蛋白產(chǎn)品一致經(jīng)過N末端氨基酸序列分析;必要時(shí)應(yīng)用SDS-PAGE, RP-HPLC和質(zhì)譜(MS)檢測(cè)其真實(shí)性。
2. 純度:應(yīng)用SDS-PAGE和RP-HPLC方法分析產(chǎn)品純度。
3. 生物活性:進(jìn)行相應(yīng)的體外(in vitro)或體內(nèi)(in vivo)活性檢測(cè)。
4. 蛋白含量:通過紫外光譜分析,SDS-PAGE電泳檢測(cè);必要時(shí)應(yīng)用HPLC定量標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。
5. 內(nèi)毒素:kinetic LAL法檢測(cè)內(nèi)毒素。
6. 微生物:重組蛋白在裝瓶之前都經(jīng)過濾除菌處理。
產(chǎn)品隨附的說(shuō)明書上載有產(chǎn)品的各項(xiàng)相關(guān)信息。請(qǐng)仔細(xì)閱讀這些信息,了解其配制和貯存提示。如果在閱讀說(shuō)明書后仍需更多信息,請(qǐng)查看以下常見問題解答,或致電我們的技術(shù)服務(wù)部門。
重組細(xì)胞因子的凍干狀態(tài)
與市場(chǎng)上已有的其他蛋白產(chǎn)品不同,PeproTech細(xì)胞因子不含carrier protein或其他添加物(如BSA、HAS、蔗糖等),而是以低鹽的形式做凍干處理,因此微量的細(xì)胞因子在凍干過程中會(huì)沉積于管內(nèi),形成很薄或不可見的蛋白層。PeproTech的質(zhì)控過程確保每管裝有非常準(zhǔn)確量的蛋白產(chǎn)品。所以我們建議在收到試劑后,務(wù)必于開蓋前先離心20-30秒,使可能附于管蓋或管壁的蛋白成分聚集于管低(此時(shí)能否見到白色沉淀均屬正常現(xiàn)象)。
重組細(xì)胞因子活性單位(units)的換算
各公司在開發(fā)出重組細(xì)胞因子并檢測(cè)其活性后,通常會(huì)以ED50(半數(shù)有效濃度)或units(活性單位)來(lái)標(biāo)識(shí)其細(xì)胞因子的生物活性。因此1mg細(xì)胞因子中所含的活性單位(units)可以理解為將1mg/ml細(xì)胞因子原液稀釋成ED50的稀釋倍數(shù),以下是二者的換算公式:重組細(xì)胞因子的穩(wěn)定性
除非產(chǎn)品說(shuō)明書上另有特別說(shuō)明,否則所有PeproTech蛋白產(chǎn)品都為凍干粉形式,在室溫下也能保持很好的穩(wěn)定性。但是,我們推薦凍干產(chǎn)品保存于-20℃。大多數(shù)凍干產(chǎn)品經(jīng)溶解和稀釋后,可短時(shí)間保存于4℃;若要進(jìn)行較長(zhǎng)時(shí)間保存,我們建議稀釋到工作液濃度并加入一定的carrier protein(如0.1% BSA),然后分裝保存于-20℃。請(qǐng)注意每一次凍融過程都會(huì)造成蛋白的部分變性,應(yīng)避免反復(fù)凍融。
重組細(xì)胞因子的交叉活性
除了少數(shù)例外,大多數(shù)人類細(xì)胞因子對(duì)小鼠細(xì)胞都有活性。許多小鼠細(xì)胞因子對(duì)人類細(xì)胞也有活力表現(xiàn),但是與相應(yīng)的人類細(xì)胞因子相比比活力較低。一些人類的細(xì)胞因子如IL-7在小鼠細(xì)胞中甚至表現(xiàn)出比相應(yīng)的小鼠細(xì)胞因子更高的比活力。而干擾素、GM-CSF、IL-3 和IL-4 是物種特異性的,對(duì)于非人類細(xì)胞幾乎沒有活性。相反,成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 (FGFs) 和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 (neurotrophins) 是高度保守的,在其它的動(dòng)物物種細(xì)胞中也能表現(xiàn)很好的活性。