新一代測序工作流程包括三個基本步驟:文庫制備、測序和數據分析。了解每一步驟的基本知識以及如何規劃您的NGS工作流程。
NGS工作流程的準備工作
大多數NGS工作流程都需要在提取后進行QC步驟。我們推薦使用紫外分光光度法來評估純度,使用熒光分析法進行核酸定量。
NGS工作流程的第1步:文庫制備
為了節省資源,可以將多個文庫混合在一起,在同一運行中進行測序——該過程稱為多重分析。接頭連接過程中,標簽序列(或說“條形碼”)會添加到每個文庫。這些條形碼可以在數據分析過程中區分文庫。
NGS工作流程的第2步:測序
在邊合成邊測序(SBS)過程中,化學修飾的核苷酸會通過天然的互補性與DNA模板鏈結合。每個核苷酸都有一個熒光標記和一個可逆終止子,后者可以阻止下一個堿基的摻入。熒光信號可以指示出加入的核苷酸種類,終止子被切割后,下一個堿基才可以繼續結合。
NGS工作流程的第3步:數據分析
如今,您可以使用直觀的數據分析應用程序來分析NGS數據,無需進行生物信息學培訓或另外雇傭實驗室人員。這些工具可以進行序列比對、變異檢出、數據可視化或解讀。